La anguila europea no madura en cautividad, por lo que es necesario el uso de tratamientos hormonales. Con el objetivo de disminuir o eliminar estos, se ha estudiado el efecto de factores ambientales (temperatura, presion, salinidad, natacion continuada) y se ha demostrado que todos ellos tienen efectos en la activacion del eje reproductor (cerebro-hipofisis-gonada). Sin embargo, solo la temperatura ha conseguido inducir un cierto grado de maduracion en ausencia de tratamientos hormonales (en hembras de anguila japonesa), y nuestro grupo ha demostrado en los ultimos años la influencia de la temperatura en el rendimiento reproductivo de machos y hembras de anguila europea. En el actual proyecto proponemos el estudio del efecto de la temperatura sobre el eje reproductor de machos de anguila. Se diseñara y se construira un prototipo de un sistema de tanques que permita realizar fluctuaciones periodicas de la temperatura del agua, tratando de reducir al minimo el estres de los peces. Se contempla la posibilidad de patentar ese diseño. Se realizara un experimento in vivo con tres grupos experimentales, dos sometidos a temperaturas constantes (20 y 10ºc) y otro con una variacion diaria de temperatura (10-20ºc) sin ningun tratamiento hormonal. Se tomaran muestras de cerebro y testiculo para su analisis epigenetico por secuenciacion masiva, identificando el patron de metilacion general, y analizando el nivel de metilacion en genes clave para la reproduccion. Con muestras del mismo experimento, tambien por secuenciacion masiva, se analizara el transcriptoma de cerebro y de testiculo (siendo la primera vez que se describe en esta especie). El analisis del transcriptoma se validara por pcr a tiempo real de los genes claves en la reproduccion que hayan sido modulados por la temperatura. Un segundo experimento in vivo usando las mismas condiciones, servira para comprobar la reproducibilidad de los resultados obtenidos por pcr a tiempo real y los de metilacion de los genes claves encontrados en el primer experimento. Paralelamente, se llevaran a cabo experimentos in vitro, comprobando el efecto directo de la temperatura (constantes vs variable) en testiculo y cerebro (por primera vez en esta especie). Se evaluara la expresion genica y el patron de metilacion en ambos organos. Tambien se analizara la respuesta fisiologica a diferentes temperaturas a hormonas clave en la reproduccion. En el caso del tejido cerebral analizaremos la respuesta a la presencia del peptido kiss1 (activador del sistema gnrh) y en el testiculo al esteroide 11-kt (estimulador de la espermatogenesis). En el ultimo año, con la informacion obtenida de los experimentos anteriores, se diseñara un nuevo experimento in vivo donde se comprobara si el empleo de las variaciones de temperatura puede ser una alternativa a los tratamientos hormonales, o al menos permitir reducirlos, o incrementar la calidad de los gametos. En conclusion, el proyecto proporciona un profundo analisis, tanto a nivel del genoma como del transcriptoma, del efecto de la temperatura en el eje reproductor de la anguila. Esta especie se considera un buen modelo ya que su ciclo reproductor es totalmente dependiente de los factores ambientales. Ademas se encuentra al inicio del arbol evolutivo de los teleosteos (elopomorfo), y el conocimiento de sus mecanismos fisiologicos aportaria informacion relevante para poder entender el efecto de la temperatura (y los posibles efectos del cambio climatico) en teleosteos