Nodavirus (VNNV) afecta a mas de 50 especies de peces, y en la acuicultura del mediterraneo, principalmente a la lubina (dicentrarchus labrax), la cual es muy susceptible. Resultados previos muestran que las lubinas infectadas con VNNV muestran un respuesta inmunitaria en menor escala que en el caso de otras especies resistentes, como la dorada, y sugieren que esta puede ser una de las razones de la gran susceptibilidad. En este sentido, y en el marco de un proyecto nacional anterior, hemos estudiado la respuesta citotoxica, una de los principales mecanismos de defensa frente a virus y, escasamente estudiado en peces. Asi, hemos demostrado que los leucocitos de lubina, por el contrario a los de dorada, son incapaces de matar a celulas infectadas con VNNV e inhibe algunos de los genes implicados en la respuesta citotoxica (perforina y granzimas). VNNV presenta transmision vetical a traves de los gametos. Nosotros hemos visto que llega y se aloja en la gonada de dorada y lubina, donde altera las funciones reproducturas e inmunitarias y genera estados de latencia. Para profundizar en estos aspectos, objeto importante de este proyecto, nos encontramos con la total falta de lineas celulares de lubina, la escasez de secuencias genicas relacionadas con las celulas citotoxicas (ctls, cd8, nk, nitrs, nilts, perforina, granzimas, etc.) Y de anticuerpos para ellas. Con las herramientas con las que contamos en la actualidad nos es imposible explicar los mecanismos implicados en la evasion de la respuesta inmune inducida por VNNV en los leucocitos y gonada de lubina. Por ello, necesitamos generar nuevas herramientas como son lineas celulares, secuenciacion masiva de genes implicados en la respuesta citotoxica y la generacion de anticuerpos para su estudio a nivel genico, proteico y funcional. Por otro lado, aunque existen vacunas efectivas frente a VNNV a nivel de laboratorio no existe ninguna que se administre en estados larvarios (la etapa mas sensible) ni por via oral (la preferida por los piscicultores) en lubinas. Por ello, haremos vacunas con virus inactivados, recombinantes o de dna, las cuales seran encapsuladas en artemia o microparticulas de alginato-quitosano, con el fin de proteger los antigenos en el intestino. Probaremos la eficacia de dichas vacunas orales en larvas de lubina evaluando tanto la respuesta inmunitaria inducida a nivel local y sistemico como la proteccion frente a infecciones por nodavirus. Teniendo en cuenta todo esto, en el presente proyecto se plantean los siguientes obtetivos: objetivo 1: caracterizacion de la respuesta citotoxica de los leucocitos frente a nodavirus. Objetivo 2: evaluar los mecanismos de evasion de nodavirus en la gonada. Objetivo 3: diseño de vacunas orales para larvas de lubina frente a nodavirus. En este proyecto se esperan como resultados: - obtener herramientas para estudiar el sistema inmunitario de lubina, principalmente la respuesta citotoxica, tales como lineas celulares, secuencias genicas y anticuerpos. Esto nos permitiria conocer algunas de las razones por las que nodavirus evade la respuesta inmunitaria y se aloja y esconde en la gonada. - Conseguir vacunas frente a nodavirus que se administren por via oral y sean eficaces en etapas larvarias.