La Besnoitiosis bovina, originada por el protozoo besnoitia besnoiti, esta considerada como una enfermedad re-emergente en europa, incluida España. Esta protozoosis origina unas perdidas economicas considerables produciendo lesiones en piel, alteraciones sistemicas y esterilidad en los sementales. En nuestro pais, la besnotiosis esta ampliamente distribuida en el ganado bovino de carne, principalmente en las zonas de montaña del norte. Desafortunadamente, no existen modelos estandarizados para el estudio de la enfermedad, se desconoce la variabilidad intra-especifica y no hay vacunas ni tratamiento disponibles. El disponer de farmacos eficaces es un objetivo que a priori podria ser alcanzado a corto-medio plazo en el caso del estadio de taquizoito, responsable de la fase aguda de la enfermedad. Mayor dificultad presenta la obtencion de farmacos eficaces frente a los quistes tisulares responsables de la fase cronica de la misma, debido a la cubierta quistica externa y la localizacion tisular de esta fase de desarrollo. Por ello, es necesario el desarrollo de modelos experimentales que nos permitan caracterizar la virulencia del parasito y valorar la eficacia de farmacos y/o vacunas. El objetivo general del proyecto es el desarrollo de modelos in vitro e in vivo de la infeccion por b. Besnoiti y su aplicacion al cribado de farmacos y comprende la realizacion de 3 objetivos especificos durante un periodo de 3 años: objetivo 1: se desarrollaran modelos in vitro en los que se estudiara la variabilidad intra-especie de b. Besnoiti. Se determinaran parametros relacionados con la virulencia, capacidad de invasion y proliferacion, de los diferentes aislados de b. Besnoiti a lo largo de su ciclo litico en celulas marc145 (empleadas de rutina para el mantenimiento y propagacion del parasito) y en celulas endoteliales bovinas (celulas diana durante la fase aguda de la enfermedad en la especie de destino). Los resultados obtenidos nos permitiran: i) poner a punto modelos in vitro; ii) determinar la existencia de variabilidad intra-especifica en la virulencia; y iii) seleccionar un aislado en base a su virulencia, que, posteriormente, se emplearan en los objetivos 2 y 3. Objetivo 2: se evaluaran varios farmacos con posible utilidad en la especie de destino, el ganado bovino. Los candidatos a evaluar se agrupan en dos categorias: farmacos convencionales con efecto coccidiostatico/ coccidiocida empleados en el ganado bovino frente a infecciones por otros protozoos apicomplejos, y farmacos de nueva generacion (inhibidores quinasa-bkis), que actuan de forma selectiva frente a las proteinas quinasas dependientes de calcio, eficaces en ensayos in vitro frente a otros protozoos apicomplejos. Para ello, se buscara una inhibicion de la invasion y/o proliferacion del parasito empleando los modelos in vitro desarrollados en el objetivo 1, las celulas endoteliales bovinas y el aislado seleccionado y se evaluara tanto su eficacia frente al estadio de taquizoito como su seguridad a nivel de la celula hospedadora. Objetivo 3: se estandarizara un modelo de infeccion experimental por b. Besnoiti en el ganado bovino, tanto en la fase aguda como en la cronica, empleando el aislado seleccionado en el objetivo 1, dos dosis y dos vias de inoculacion. Los animales seran monitorizados clinica e inmunologicamente a lo largo de todo el experimento (4 meses) y, al final del mismo, se estudiaran las lesiones y la presencia del parasito en los diferentes organos.