La crioconservacion de ovocitos y embriones es un punto crucial para la propagacion y conservacion de recursos geneticos animales. Sin embargo, tanto los ovocitos como los embriones son muy sensibles al enfriamiento y a la crioconservacion y, pesar de los avances conseguidos en estos ultimos años, aun subsisten deficiencias en los metodos utilizados para su conservacion. Actualmente, existen dos metodos para la crioconservar ovocitos y embriones: la congelacion lenta y la vitrificacion. La vitrificacion se ha convertido en la alternativa mas viable y prometedora a las tecnicas tradicionales, especialmente cuando se trabaja con ovocitos o embriones producidos in vitro o micromanipulados, ya que es una tecnica sencilla, rapida y no requiere del uso de un biocongelador. Sin embargo y hasta la actualidad, los resultados de supervivencia, desarrollo embrionario y gestacion obtenidos tras la vitrificacion de ovocitos y embriones piv no son satisfactorios para la mayoria de las especies. La investigacion tradicional orientada a la optimizacion de los protocolos de vitrificacion se ha centrado en los enfoques tecnicos o metodologicos relacionados con regimenes de exposicion a crioprotectores, velocidades de enfriamiento/calentamiento o los soportes utilizados para vitrificar. Teniendo en cuenta que estos metodos de mejora han sido ampliamente examinados, el proyecto que se solicita pretende mejorar la eficiencia de la crioconservacion de ovocitos y embriones bovinos a traves de la modificacion de la composicion inherente de la celula mediante modificaciones en la composicion de la membrana plasmatica o bien la aplicacion de un estres subletal con la finalidad de aumentar su resistencia a la crioconservacion. Para ello, los objetivos planteados en el proyecto son aumentar la supervivencia y capacidad de desarrollo de ovocitos y embriones bovinos a traves de a) la adicion de colesterol a las membranas de ovocitos y embriones; b) someter a los ovocitos y embriones a un estres subletal previo a la vitrificacion a traves de la tecnologia de alta presion hidrostatica, estres osmotico, estres oxidativo y estres por calor. En el caso de los ovocitos la vitrificacion se llevara cabo por el metodo cryotop mientras que para los embriones se utilizara el metodo vittrans ya que permite el calentamiento y transferencia directa de los embriones vitrificados directamente en granja. Los efectos provocados por estos tratamientos se evaluaran a traves de las posibles modificaciones de su estructura celular o de supervivencia (por impedancia electrica) y desarrollo embrionario tras la fecundacion in vitro en el caso de los ovocitos. En cuanto a los embriones, se evaluaran los porcentajes de supervivencia, viabilidad y calidad embrionaria obtenidos tras ser sometidos a los distintos procesos. Asimismo, se utilizaran modelos con embriones de conejo producidos in vivo para evaluar los efectos del desarrollo de tolerancia a la crioconservacion mediante la aplicacion de factores estresantes subletales. Con los resultados de este proyecto determinaremos si las modificaciones de ovocitos y embriones a nivel celular permiten inducir adaptacion al estres e incremento de la criotolerancia. En este sentido, se podran establecer mecanismos de mejora de la respuesta a la crioconservacion, mecanismos que pueden ser aplicables tanto en ganaderia como en biomedicina humana.