Photobacterium damselae subsp. Damselae es un patogeno que causa septicemias mortales en numerosas especies de peces de elevado interes en la acuicultura. Su aislamiento como principal patogeno en especies de reciente introduccion en la acuicultura marina española indica que se trata de un patogeno emergente. Ademas, es un microorganismo zoonotico que causa septicemias fulminantes en el ser humano. La elucidacion de las moleculas y los mecanismos que explican la patogenesis bacteriana es esencial para el diseño de aplicaciones practicas, que van desde el diagnostico al diseño de nuevos y mejores antibioticos y vacunas. Recientemente demostramos que algunas cepas de esta bacteria contienen un plasmido de virulencia, pphdd1, que codifica dos citotoxinas hemoliticas: la damselisina (dly) y la toxina formadora de poro hlyapl, y ambas son factores de virulencia para peces. Sin embargo, gran parte de las cepas aisladas recientemente en España causantes de mortalidades en peces de cultivo carecen de dicho plasmido, siendo igualmente muy citotoxicas para cultivos celulares de peces. Asi, se desconoce totalmente cuales son los factores de virulencia de estas cepas que se aislan tan frecuentemente. Recientemente, en el desarrollo de un proyecto de caracter autonomico previamente financiado, realizamos un analisis in silico del genoma de dos cepas virulentas de este patogeno. Esto nos ha permitido identificar en una de las dos cepas un plasmido hasta entonces desconocido, pphdd2, que codifica un sistema de secrecion de tipo iii con proteinas efectoras candidatas asociadas. Por ello, en este proyecto nos planteamos estudiar, por una parte, el papel que juegan en la toxicidad celular las proteinas efectoras del sistema de secrecion de tipo iii codificado en el nuevo plasmido (pphdd2). Por otra parte, secuenciaremos y estudiaremos en detalle las singularidades del genoma de varias cepas aisladas de mortalidades de peces esparidos en España para asi identificar las bases geneticas de actividades enzimaticas con potencial citotoxico (proteasas, acetilcolinesterasas y otras). La identificacion de los marcadores de virulencia que explican la patogenicidad de p. Damselae subsp. Damselae sera esencial para sentar las bases de tres estrategias contra la vibriosis causada por este patogeno emergente: (1) prevencion: futuro diseño de vacunas efectivas y enriquecimiento de las mismas con moleculas antigenicas; (2) control: identificacion de dianas terapeuticas, y (3) diagnostico: diseño de protocolos de deteccion basados en pcr. Objetivos concretos: 1. Caracterizar funcionalmente, y determinar el papel que juegan en la citotoxicidad para lineas celulares, las proteinas efectoras codificadas en el plasmido pphdd2. 2. Secuenciar y analizar en detalle el genoma completo de cepas virulentas aisladas recientemente de mortalidades en cultivos de peces 3. Caracterizar funcionalmente nuevos factores de virulencia candidatos, y su relacion con la citotoxicidad: actividades colagenasa, acetilcolinesterasa, fosfolipasa, esterasa-lipasa y otras que se puedan identificar por analisis de genomica in silico. 4. Aplicar los resultados obtenidos, para (i) identificar productos extracelulares potencialmente antigenicos y construccion de cepas atenuadas de interes para formulaciones vacunales contra la vibriosis en peces, (ii) identificacion de dianas terapeuticas, susceptibles de ataque por farmacos (iii) diseñar un protocolo de diagnostico basado en pcr.